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水中糞大腸菌群的常見檢測(cè)方法

水是人類賴以生存的基礎(chǔ)，隨著人類社會(huì)生產(chǎn)的發(fā)展和技術(shù)的進(jìn)步，水質(zhì)污染現(xiàn)象日趨嚴(yán)重。病原微生物污染是我國(guó)水體污染的主要原因之一。污染水體的病原微生物種類繁多，而水中糞大腸菌群是水體糞便污染的指示菌，通過(guò)監(jiān)測(cè)該項(xiàng)目可以正確的判斷監(jiān)測(cè)水域內(nèi)污染程度，有效預(yù)報(bào)和控制流行疾病的發(fā)生與傳播。

常見的水中糞大腸菌群檢測(cè)方法如下：

1、多管發(fā)酵法

通過(guò)將污染水樣接種入多根試管中進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，利用大腸菌群繁殖時(shí)使乳糖發(fā)酵，并能使乳糖蛋白胨培養(yǎng)液變黃，同時(shí)產(chǎn)生氣泡的特有現(xiàn)象，根據(jù)不同接種量的發(fā)酵管所表現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果的數(shù)目，從MPN表中查的相應(yīng)的MPN指數(shù)，計(jì)算每升水中糞大腸菌群的最近似值。

2、濾膜法

將水樣注入已滅菌的放有孔徑為0.45μm濾膜的濾器中，經(jīng)過(guò)抽濾，將細(xì)菌截留在膜上，然后將濾膜貼于M-FC培養(yǎng)基上，經(jīng)44.5℃溫度下進(jìn)行培養(yǎng)，計(jì)數(shù)培養(yǎng)基上呈藍(lán)色或藍(lán)綠色的菌落，計(jì)算出每升水的糞大腸菌數(shù)。

3、紙片法

采用紙片、紙膜、膠片等作為培養(yǎng)基載體，將特定的培養(yǎng)基和顯色物質(zhì)附著在上面，通過(guò)糞大腸菌群在上面的生長(zhǎng)、顯色來(lái)測(cè)定的方法，即糞大腸菌在紙片培養(yǎng)基上呈紅色菌落，菌落周圍產(chǎn)生黃圈是糞大腸菌分解乳糖產(chǎn)酸使指示劑變色的結(jié)果。

4、酶底物法

將加入酶底物檢測(cè)試劑的100ml水樣注入51孔或97孔的定量測(cè)量盤中進(jìn)行密封后培養(yǎng)，由于大腸菌群細(xì)菌能產(chǎn)生一種β-半乳糖苷酶分解PG使得培養(yǎng)液呈黃色，同時(shí)大腸埃希氏菌可以產(chǎn)生葡萄糖醛酸酶分解MUG，培養(yǎng)液將會(huì)在波長(zhǎng)366nm紫外光下產(chǎn)生熒光反應(yīng)。通過(guò)計(jì)算有黃色反應(yīng)和熒光反應(yīng)的孔穴數(shù)，可對(duì)照MPN表查出其代表的糞大腸菌群最可能數(shù)水中糞大腸菌群。

5、聚合酶鏈?zhǔn)郊夹g(shù)

提取糞大腸菌群混懸液和待測(cè)水樣的DNA，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增編碼約260bp的LacZ基因（β-半乳糖苷酶基因）和約150BP的UdiA基因（β-D-半乳糖苷酶基因）的DNA片段，分別檢測(cè)大腸菌群數(shù)和大腸桿菌。

6、熒光原位雜交技術(shù)

由于糞大腸菌群特異的DNA序列，借助熒光標(biāo)記的特異寡聚核苷酸片段作為的探針與待測(cè)水樣中的DNA分子雜交，將雜交細(xì)胞經(jīng)熒光檢測(cè)體系在鏡下對(duì)待測(cè)DNA進(jìn)行定性、定量分析，確定菌群數(shù)。

目前，大腸菌群檢測(cè)方法發(fā)展很快，已提高到分子生物學(xué)水平，使檢測(cè)更快速、酶底物法以其操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)周期短，將取代多管發(fā)酵法、濾膜法等傳統(tǒng)方法，尤其是酶底物法采用密封培養(yǎng)技術(shù)，在檢測(cè)醫(yī)院污水時(shí)可以減少人員接觸而降低檢測(cè)人員的致病風(fēng)險(xiǎn)，因此具有更強(qiáng)的實(shí)用價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值，正是目前水中糞大腸菌群的快速檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法之一。